3.1. En Vitro Estudios

Un pequeño número de estudios reportan que PG es capaz de tratar H. pylori infección. El metanol extracto de piel de de PG exhibió una notable anti- H. pylori actividad in vitro , como se muestra por el tamaño de la zona de inhibición en el método de difusión de disco, que fue comparable a la del compuesto de referencia metronidazol (MIC 8 μ g / ml) [ 25 ]. En otro estudio, el extracto metanólico de PG cáscara de la fruta exhibe alta actividad frente a H. pylori cepas (39 mm zona de inhibición de 100 μ gdisco -1 ) en comparación con otros extractos de plantas [ 26 ], en particular, ocho de los nueve cultivares PG mostró alta actividad frente a esta bacteria (media del diámetro de la zona de inhibición que van desde 16 hasta 40 mm a 50 μ g disco -1 ).Fuerte anti- H. pylori actividad de PG extracto etanólico de pericarpio ha sido también documentada, y la zona de inhibición más alta (16,5 mm) se encontró en 2,5 mg disco -1 [ 27 ].

De hecho, estudios posteriores con extractos PG solos y combinados con medicamentos que se usan comúnmente para H.pylori erradicación debe llevarse a cabo antes de considerar PG como agente antimicrobiano eficaz.

3.2. Estudios en Animales

La gastritis inducida por etanol . Úlceras inducidas por etanol son el resultado de un efecto directo de etanol sobre la mucosa gástrica, sobre todo debido a su capacidad de inducir la necrosis de las células epiteliales gástricas superficiales y la erosión [ 28]. Un in vivo en estudio mostró que la fruta extracto metanólico corteza PG mostró una reducción significativa en el índice de úlcera (UI) en la gastritis inducida por etanol en ratas, el extracto, cuando se probó a 250 mg / kg y 500 mg / kg, inhibió la interfaz de usuario 21 % y 63%, respectivamente, mientras que el compuesto de referencia ranitidina (50 mg / kg) mostró una inhibición 51%. Las ratas tratadas con 500 mg / kg de extracto de PG también fueron protegidos de la hemorragia intraluminal [29 ]. En otro estudio, el extracto hidroalcohólico (metanol : agua 80 : 20) de las flores secas de PG redujo significativamente la interfaz de usuario (-87,5% a 980 mg / kg), mientras que la mitad de la dosis (490 mg / kg) y omeprazol (20 mg / kg) mostraron 65% de inhibición y 49,6%, respectivamente [ 30 ].

Algunos parámetros bioquímicos, tales como la superóxido dismutasa (SOD), catalasa, peroxidación de los lípidos de tejidos, y glutatión peroxidasa (GSH-PX), se redujeron en los animales tratados con ácido acetilsalicílico y volvieron a los niveles basales en los animales que recibieron la cáscara de la fruta extracto metanólico [ 29 ]. Taninos PG inhibió significativamente la lesión de la mucosa inducida por etanol en una manera dependiente de la dosis, y el efecto se atribuye a la disminución de la peroxidación lipídica, así como los niveles de NO y para la modulación tanto de SOD y GSH-Px en la mucosa gástrica [ 31 ].

Gharzouli et al. demostró que el extracto acuoso de PG cáscara (AEP) muestra un efecto gastroprotector en ratas con lesiones gástricas inducidas por etanol [ 32 ]. La administración simultánea de etanol y AEP disminuyó significativamente las lesiones gástricas y la interfaz de usuario (de -53.7% a -76.9%).

Entre los compuestos puros, Becerra et al. demostró que el pretratamiento oral con EA (3, 10, y 30 mg / kg) redujo significativamente la lesión gástrica por 59, 79, y 70%, respectivamente, mientras que el efecto inhibidor por ranitidina (50 mg / kg) fue -83% [ 33 ].

No proteico sulfhidrilos (NP-SH) son compuestos antioxidantes que participan en el mantenimiento de la integridad gástrica. Ellos controlan la cascada de citocinas inflamatorias y promover la desintoxicación y excreción de ROS producido principalmente por agentes nocivos y el estrés. El pretratamiento con EA (3 y 10 mg / kg) aumentó significativamente el contenido de NP-SH en ratas sugiriendo por lo tanto un papel protector de EA contra la gastritis inducida por etanol [ 33 ].

TNF- α liberado por los monocitos / macrófagos desempeña un papel clave en la iniciación de la cascada de otras citocinas proinflamatorias, incluyendo IL-1 β , IL-6, e IFN- γ , que son biomarcadores importantes en la inflamación gástrica. Las ratas sometidas a la úlcera inducida por etanol después del tratamiento con EA (10 mg / kg) mostró los niveles de TNF αsignificativamente menor que el grupo tratado con etanol (11,1 ± 1,1 frente a 6,2 ± 1,0 pg / ml, resp.) [ 33 ].

NO se considera que es uno de los agentes endógenos defensivas más importantes en la mucosa gástrica. El tratamiento previo con inhibidores de la NO-sintasa, tales como L-NAME, se ha demostrado que empeoren la úlcera inducida por etanol. Las ratas pretratadas con L-NAME aumentó la severidad de las lesiones gástricas inducidas por etanol, mientras que los tratamientos con L-arginina, en la ausencia o en la presencia de EA, atenuó significativamente el efecto deletéreo de la L-NAME (-22% y -19,6 %, resp.). Cuando EA se coadministrated con L-arginina, se encontró que el efecto gastroprotector 2-veces más alta (-39%) con respecto a solo EA [ 33 ].

La gastritis inducida por AINE. fármacos anti-inflamatorios no esteroideos (AINE), tales como el ácido acetilsalicílico, indometacina, ibuprofeno, y se utilizan comúnmente como analgésicos en muchas condiciones inflamatorias agudas y crónicas.El ácido acetilsalicílico interfiere con los mecanismos de protección gástrica, tales como el moco y la secreción de bicarbonato, hidrofobicidad superficie epitelial, y el flujo sanguíneo de la mucosa. El ácido acetilsalicílico interfiere principalmente con la biosíntesis de las prostaglandinas citoprotectoras a través de la inhibición de la ciclooxigenasa (COX); resultados de este efecto en una producción excesiva de leucotrienos y otros productos de la ruta de la 5-lipoxigenasa.

Extracto hidroalcohólico PG (metanol 70%) a partir de corteza en polvo mostró una reducción significativa en la interfaz de usuario de las ratas tratadas con 400 mg / kg de ácido acetilsalicílico. El efecto inhibidor mostró por el extracto de PG, en 250 y 500 mg / kg, fue de -22,4% y -74,2%, respectivamente, mientras que la ranitidina (50 mg / kg) mostró una inhibición 44,7% [ 29 ]. En otro estudio, el extracto hidroalcohólico (metanol : agua 80 : 20) obtiene a partir de flores en polvo de PG, cuando se sometieron a 980 mg / kg y 490 mg / kg, inhibió la ulceración por 83,9% y 73,8%, respectivamente, lo que sugiere que PG flores contienen compuestos con un efecto protector gástrico dependiente de la dosis [ 30 ].

Las prostaglandinas producidas por la COX-1, principalmente IGP 2 y PGE 2 , son esenciales para la protección de la mucosa gástrica. El efecto ulcerogénico de los AINE parece estar relacionado con la inhibición de la síntesis de prostaglandina endógena, a pesar de que también se ha establecido que la indometacina modifica otros mecanismos protectores de la mucosa gástrica, incluyendo la secreción gástrica y la permeabilidad de la barrera de la mucosa gástrica [ 34 ]. La indometacina se sabe que aumenta los leucotrienos C 4 y reduce PGE 2 niveles. Mejora de los resultados de la síntesis de leucotrienos en los efectos perjudiciales, que pueden inducir vasoconstricción mucosa, y mejora la lesión inducida por los AINE [ 35 ].

Hidroalcohólico (metanol : agua 80 : 20) extracto de las flores en polvo de PG (980 mg / kg) mostró la prevención significativa de las lesiones gástricas en ratas tratados con indometacina, mayor de inhibición de la úlcera (83,9%), y la secreción reducida de ácido gástrico en comparación con omeprazol 20 mg / kg (69,5%). Aunque los compuestos puros no fueron probados durante este estudio, los autores sugieren que la actividad anti-ulcerogénico del extracto puede ser debido a la presencia de saponinas, taninos y flavonoides [ 30 ].

El tratamiento con EA (3, 10, y 30 mg / kg) redujo significativamente por la interfaz de usuario 82, 74, y 77%, respectivamente, mientras que el efecto inhibidor, después del tratamiento con cimetidina (100 mg / kg), fue del 88% [ 33 ]. El leucotrieno B 4 (LTB4 ) contribuye a la lesión gástrica AINE mediante la promoción de la quimiotaxis de los intensos neutrófilos y la adhesión de los leucocitos al endotelio vascular. Los niveles plasmáticos de LTB 4 también se redujeron con el tratamiento de la EA (3, 10, y 30 mg / kg), pero los niveles de prostaglandina E 2 (PGE 2 ) en mucosa gástrica no se vieron afectados [ 33 ]. En otro estudio, el tratamiento con EA o omeprazol durante 3 días upregulated significativamente la mucosa PGE 2 nivel por 2,0-y 1,6-pliegues, con respecto al grupo no tratado [ 36 ]. En el mismo estudio, indometacina administrados por los ratones aumentaron mucosa mieloperoxidasa (MPO) la actividad en el tercer día. El tratamiento con EA (7 mg / kg una vez al día durante 3 días, por vía oral) y omeprazol reduce significativamente la actividad de MPO por 77,9% y 68,1%, respectivamente. Ulceración agotado significativamente la expresión de la COX-gástrico 1. En este estudio, la COX-2 expresión no fue modificada significativamente por el tratamiento con indometacina, por el contrario, EA aumentó significativamente la COX-1 y COX-2 expresión en el grupo de ulcerada [ 36 ].

El mismo estudio investigó el efecto de la EA sobre la liberación de citoquinas inducida por indometacina en la mucosa gástrica.La administración de indometacina aumentó la liberación de varias citocinas, incluyendo el TNF- α (1,8 veces), IL-1 β (1,9 veces), y la disminución de IL-4 (2,3 veces), IL-10 (1,2 veces), el VEGF (1,7 veces), EGF (1,6 veces), y el HGF (1,5 veces), mientras que la IL-6 secreción no se vio afectada. EA (7 mg / kg) redujo significativamente las citoquinas proinflamatorias (TNF- α , IL-1 β , e IL-6) de liberación por 1.9-, 1.5-, y 1,6-pliegues, respectivamente; un aumento significativo se observó para la lucha contra citoquinas-inflamatorias IL-4 y los niveles de IL-10 y factores de crecimiento (VEGF, EGF, y el HGF) niveles. Cuando EA se administró a los animales, que era capaz de disminuir el TNF α , IL-1 β , IL-6 y de liberación, y un aumento de la IL-4 y se observó IL-10. Cuando EA se dio después de pretratamiento inhibidor COX (celecoxib, NS398), el efecto protector fue parcialmente perdido [ 36 ].

Acético gastritis inducida por ácido. No hay estudios que tratan con el efecto de los extractos de PG en la gastritis inducida por ácido acético están presentes en la literatura, mientras que se producen algunos estudios sobre el compuesto puro EA. El tratamiento con EA (3, 10, y 30 mg / kg) durante 14 días no redujo el área ulcerada causado por la aplicación de ácido acético, pero mostró una reducción significativa en el espesor de la úlcera (-21,3%, -25,6 % y -26,2%, resp.) en comparación con el grupo de vehículo. Cimetidina redujo significativamente el área ulcerada y el espesor de la úlcera por 33,4% [ 33 ].

En el modelo de úlcera de ácido acético los niveles plasmáticos de TNF α fueron significativamente inferiores en los animales tratados con EA a la dosis de 3 mg / kg con respecto al grupo de control (8,8 frente a 19,3 pg / ml, resp.) [ 33 ]. IL-4 es una citoquina antiinflamatoria capaz de exacerbar, si se libera excesivamente, la lesión inflamatoria en el estómago. Se ha demostrado que la ulceración aumentó drásticamente los niveles plasmáticos de IL-4 por 6 veces, y la co-administración con EA suprimió de forma significativa el aumento de 65,0%, 60,6%, y 44,2% a los 3 mg / kg, 10 mg / kg , y 30 mg / kg, respectivamente [ 33 ]. En una manera similar, ulceración aumentó los niveles plasmáticos de IL-6 por 12,5 veces en comparación con el grupo control, y EA inhibió significativamente los niveles de IL-6 por 75%, 73%, y 48% a los 3 mg / kg, 10 mg / kg, y 30 mg / kg, respectivamente. La misma tendencia se observó para el IFN- γ . Ulceración ácido acético aumentó significativamente los niveles de IFN- γ por 7,2 veces, en comparación con el grupo de control. El pretratamiento con las tres concentraciones de EA inhibió significativamente el IFN- γ gastritis inducida por 83,8%, 63%, y 54%. IL-1 β , IL-10, y los niveles de VEGF fueron indetectables en el decimocuarto día de la inducción de la úlcera en este modelo de la gastritis [ 33 ].

Gastritis con ligadura del píloro. El hidroalcohólica (metanol : agua 80 : 20) extracto de flores PG demostró una reducción significativa en el volumen de la secreción de ácido gástrico y la acidez total del jugo gástrico en ratas con gastritis con ligadura del píloro, mientras que el pH del jugo gástrico aumentó. Administración del extracto (980 se encontró mg / kg) para reducir el volumen de ácido gástrico hasta 40,0% en comparación con el grupo de control, la reducción del volumen gástrico (-24,4%) estaba presente también cuando el extracto se administró a los la dosis más baja (490 mg / kg) [ 30 ]. En otro estudio, PG taninos aumentó significativamente la secreción de moco adherente y moco libre, pero no afectó a la acidez libre, acidez total, el volumen de jugo gástrico, y la actividad de la gastrina pepsina inducida por la ligadura de píloro [ 31 ].

PG extractos hidroalcohólicos de etanol (50%) de la cáscara (100 mg / kg), corteza (500 mg / kg), y la semilla (500 mg / kg) redujo significativamente la lesión de la mucosa en el sexto día del tratamiento, que muestra el efecto antiulceroso [ 37 ]. En el mismo estudio, EA reduce la secreción de ácido gástrico a 65-70% en ratas con ligadura del píloro después de la administración intraperitoneal a los 5 y 10 mg / kg, aunque el efecto no fue estadísticamente significativa. Por el contrario, la acidez se redujo significativamente por EA (5 mg / kg) el tratamiento [ 38 ].

Gástrico isquemia / reperfusión. isquemia gástrica inducida durante 20 minutos a la hemorragia de la arteria carótida produce una marcada reducción del flujo sanguíneo de la mucosa gástrica (GMBF) hasta el 40-50% de los valores basales. El GMBF a continuación, se incrementó sobre los valores basales durante 15 minutos de reperfusión, alcanzando un máximo de 140-160% antes de volver gradualmente a los niveles basales. Las ratas tratadas con EA (6 mg / ml) o superóxido dismutasa (15000 unidad / kg / h) no mostraron diferencias en GMBF con respecto al grupo de control [ 39 ].

Reducción de lesiones hemorrágicas después de la isquemia / reperfusión gástrica comenzó significativamente a 3 mg / ml de EA. El aumento de los niveles de peroxidación lipídica inducida por la isquemia / reperfusión se inhibió significativamente cuando los animales fueron pretratados con cualquiera de EA (6 mg / ml) o superóxido dismutasa (15000 unidad / kg / h), siendo la inhibición 78,3% y 82,6%, respectivamente [ 39 ].

En otro estudio, la aplicación tópica de NH 4 OH (60 mM) produjo una reducción persistente de la diferencia de potencial gástrico en el estómago hizo isquémica por sangrado y dio lugar a daños hemorrágico 1 horas más tarde. El desarrollo de las lesiones gástricas inducidas por NH 4 OH además de isquemia fue dependiente de la dosis inhibida por la pre-exposición de la mucosa a EA (1-6 mg / ml), y se observó un efecto significativo a concentraciones por encima de 3 mg / ml [ 30 ].

La gastritis inducida por el estrés. No hay estudios que investigan el efecto de extractos PG contra la gastritis inducida por el estrés se han publicado hasta el momento. Murakami et al. informe que EA inhibió significativamente la aparición de las lesiones gástricas inducidas por el estrés en 5 mg / kg [ 38 ], mientras que no se investigó el efecto de los otros compuestos puros, incluyendo equipos de expertos y ANS.

4.1. En Vitro Estudios

PG jugo y piel / Extracto de cáscara . El efecto anti-inflamatorio de PG en un in vitro modelo intestinal fue descrito en primer lugar en 2006 en un estudio de investigación de los mecanismos moleculares que subyacen a sus propiedades antitumorales [ 40 ]. Se demostró que el pretratamiento de una línea celular de cáncer de colon con el jugo de PG comercial (6-50 μ g / ml), el total de la granada taninos (TPT, 30-200 μ g / ml), y punicalagina (25-200 μ g / ml ) inhibe la actividad AKT, NF- κ B activación, y la COX-2 en la expresión inducida por TNF α [ 40 ]. Jugo de PG mostró la actividad más alta en estos parámetros con respecto a TPT y el componente puro, lo que indica que más de un compuesto bioactivo solo contribuye a la actividad biológica ejercida por el extracto. El uso de un modelo celular diferente (las células intestinales humanas Caco-2), Romier-Crouzet et al. demostró que el tratamiento previo con un extracto acuoso polifenólico de PG cáscaras (POMH) reduce muchos mediadores de la inflamación [ 41]. El extracto, a la concentración de 50 μ M (expresado como fenoles totales), inhibió significativamente la secreción de la quimiocina IL-8 y la producción de NO después de la estimulación por IL-1 β o una mezcla de los estímulos proinflamatorios.También exhibió un efecto inhibitorio sobre la secreción de PGE 2 por la COX-1, así como la COX-2 en respuesta a IL-1 βestimulación [ 41 ]. Los autores explican esta actividad anti-inflamatoria con la inhibición de NF- κ B, la activación y ERK-1/2 fosforilación; ambos sistemas están implicados en la IL-8, NO y PGE 2 expresión [ 41 ]. El mismo grupo ha demostrado que el pretratamiento con extracto de cáscara de PG (POMH, 100 μ g / ml) y su pura elagitanino punicalagina (50 μ M) podría modificar los niveles de transcripción de los genes que codifican para IL-6 y MCP-1 en células Caco-2 diferenciadas las células tratadas con una mezcla de estímulos proinflamatorias (IL-1 β , TNF- α , IFN- γ , y LPS) [ 42 ]. No se observó efecto en la ausencia de condiciones proinflamatorias y de la IL-8 expresión, mientras que POMH así como punicalagina disminución de la secreción de IL-8, IL-6, y MCP-1 [ 42 ]. Una interacción directa entre punicalagina y citoquinas también se demostró, lo que sugiere que los ETs POMH podrían interactuar con las citoquinas proinflamatorias en la luz intestinal, la disminución de la comunicación intercelular y la limitación de la inflamación local y sistémica [ 42 ].

Los metabolitos PG y urolitinas . Los compuestos fenólicos contenidos en extractos de PG son de particular importancia durante la inflamación intestinal. De hecho, se demostró que sólo un porcentaje muy pequeño de los polifenoles ingeridos con la dieta se absorbe en el intestino delgado, mientras que la mayoría de ellos permanecen en el lumen del intestino, donde se contrarrestan y son metabolizados por la microbiota intestinal. A este respecto, se demostró que, después de una digestión in vitro , AN, compuestos fenólicos, y la vitamina C presente en el zumo de PG disminuye su solubilidad, comprometer la cantidad de compuestos que pueden ser absorbidos por las células intestinales y su biodisponibilidad [ 20 ]. Sin embargo, esta permanencia de los compuestos fenólicos ingeridas con PG en el lumen intestinal mejora las interacciones con la microbiota intestinal.Muchos puntos de la evidencia científica señala la importancia de la microbiota intestinal humana hacia la mejora de la salud y de la génesis de diversas enfermedades. De hecho las especies de bacterias beneficiosas, como Bifidobacterium y Lactobacillus , constituyen una barrera importante contra el crecimiento excesivo de las cepas de patógenos externos e internos, cuya prevalencia provoca enfermedades intestinales crónicas y agudas y se ha asociado con el envejecimiento y el cáncer [ 43 ]. Por esta razón, la modulación de la microbiota intestinal de los suplementos dietéticos y la ingesta de alimentos es de importancia clave para el mantenimiento del equilibrio fisiológico. En este sentido, un suplemento dietético PG comercial derivado de la extracción de material residual de la producción de zumo (POMx) y punicalagina demostró una toxicidad selectiva hacia las bacterias intestinales patógenas en comparación con las bacterias probióticas [ 44 ]. En particular, POMx, así como punicalagina y EA, inhibieron significativamente Clostridium y Staphylococcus aureus crecimiento. Punicalagina mostró un efecto inhibidor también contra el crecimiento de Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa (IC 50 9,2 y 3,2 μ M, resp.). Lactobacilos probióticos no se vieron afectados por los componentes de PG, mientras que el efecto positivo sobre las bifidobacterias era específico de la especie [ 44 ]. Las posibles explicaciones de los mecanismos que subyacen el efecto antimicrobiano frente a bacterias patógenas se han planteado la hipótesis de: (i) los taninos podrían crear complejos estables con proteínas o con iones metálicos fisiológicos esenciales para la supervivencia de las bacterias, (ii) los polifenoles pueden disminuir el pH del ambiente intestinal, favoreciendo la el crecimiento de probióticos en lugar de bacterias patógenas [ 44 ]. La larga permanencia (hasta 56horas en el colon antes de la excreción de [ 45 ]) de PG elagitaninos y la interacción con la microbiota intestinal conducen a la formación de numerosos metabolitos, que podría explicar las diferentes actividades biológicas en este nivel. A través in vitrosistema de fermentación por lotes-cultivo se investigó el efecto del extracto de POMx punicalagina y en el crecimiento de las bacterias del intestino y la producción de metabolitos activos. POMx, pero no punicalagina, mejora de forma significativa el crecimiento de bacterias totales, así como beneficioso bifidobacterias y lactobacilos, siendo el efecto en contraste con los resultados anteriores [ 46 ]. El extracto también aumentó la producción de ácidos grasos de cadena corta, acetato, butirato, propionato y [ 46 ], los compuestos que están relacionados con la inhibición de la proliferación preneoplásicas y la aceleración de la conversión de colesterol en ácidos biliares [ 43 ]. En lo que respecta al metabolismo de PG elagitaninos, mientras punicalagina no se detectó en los medios de fermentación en cualquier tiempo de recogida, después de 10 horas de incubación con POMx hubo un pico de ácido elágico (EA) que desapareció cuando dibenzopyranones urolitinas A, C, y D aparecido [ 46 ]. Urolithin B no se detectó en el intestino delgado, lo que sugiere que el metabolismo de los ETs se produce en el colon, así, y la formación de este compuesto es el último paso del metabolismo de los ETs.

Tanto urolitinas C y D, así como urolithin A mostraron una alta actividad antioxidante in vitro (IC 50 0.16, 0.33, y 13,6 μ M, resp. para urolithin C, D y A) [ 47 ], pero ¿cuáles son los efectos de la metabolitos PG en la inflamación intestinal? En el primer estudio, los efectos antiinflamatorios de EA (50 μ se evaluaron M) en las células diferenciadas Caco-2 tratados con una mezcla de estímulos proinflamatorias (IL-1 β , TNF- α , IFN- γ , y LPS) sobre la secreción y mRNA expresión de las diferentes biomarcadores inflamatorios (IL-6, IL-8, MCP-1, e IL-10). EA disminuyó sólo MCP-1 e IL-8 secreción, pero el efecto no fue estadísticamente significativo, y no se observó ningún efecto sobre los niveles de mRNA de estas citoquinas [ 48 ]. Sin embargo, en el mismo estudio, EA regulados a la baja la transcripción de algunos genes implicados en la inflamación intestinal, como STAT-3, un factor de transcripción responsable de la persistencia de la activación de NF- κ B [ 48 ]. En otro estudio, EA, urolitinas A y B, y una mezcla de ellos, a una concentración alcanzable en el lumen intestinal después del consumo de PG (10 μM para EA y 40 μ M para urolitinas), inhibieron el crecimiento de células Caco-2 cáncer células, la desactivación de la vía de señalización de ERK-[ 49 ]. Se obtuvieron resultados opuestos en la línea celular de fibroblastos de colon humano normal CCD18-Co tratado con IL-1 β , como un estímulo proinflamatorio, y con diferentes concentraciones (1-10 μ M) de EA y urolitinas A o B ya que ni urolitinas ni EA fue capaz de disminuir la fosforilación de p-ERK1 / 2 [ 50 ]. Los miofibroblastos en la mucosa del colon juegan un papel importante en la respuesta inflamatoria intestinal incluso por la liberación de PGE 2 . En el mismo estudio se demostró que urolithin Una disminución de la PGE 2 de producción, la regulación negativa de la COX-2 y mPGES-1 expresiones pero no su actividad enzimática. Reducción de PGE 2 producción por urolitinas podría explicarse por la inhibición de NF- κ B, la activación y la vía de p38 MAPK [ 50 ]. No tiene efectos anti-inflamatorios se observaron con EA [ 50 ]. Los autores plantearon la hipótesis de que la actividad anti-flogísticos demostrado por urolitinas podría ser debido a un efecto mediado por el receptor, debido a que no se encontraron metabolitos en los medios de comunicación celulares o extractos intracelulares después de la incubación de las células con urolitinas A, B o EA [ 50 ]. Utilizando el mismo modelo celular de fibroblastos de colon humanos tratados con IL-1 β o TNF- α como estímulos proinflamatorios y urolitinas A (40 μ M), B (5 μ M) o EA (1 μ M), se demostró que todos los estos metabolitos inhiben dos procesos críticos de la respuesta inflamatoria: migración de fibroblastos y la adhesión de los monocitos. Una mezcla de urolitinas A, B y EA completamente abolido IL-1 β inducción por PGE 2 , y esta actividad se debe principalmente a urolithin A [ 51 ], de acuerdo con otro estudio anterior [ 50 ]. El efecto no se mantuvo cuando TNF α se utilizó como un estímulo, lo que indica que los metabolitos PG podrían explicar su acción por una vía dependiente de desafío [ 51 ]. PAI-1 es otra molécula profundamente asociado con el estado inflamatorio de la mucosa intestinal, cuya expresión está altamente inducida por la IL-1 β y TNF α y está estrictamente relacionado con la migración de fibroblastos. La mezcla de metabolitos y urolithin Un regulados a la baja la expresión de PAI-1 y también ejercen un efecto preventivo de la inhibición de algunos de los factores de la familia PDGF, conocida por estar involucrada en la migración celular [ 51 ]. Durante la inflamación, la presencia de citoquinas, tales como IL-1 β y TNF- α induce la expresión de quimiocinas, en particular, IL-8, y moléculas de adhesión (por ejemplo, ICAM-1 y VCAM-1) en miofibroblastos subepiteliales colon, favoreciendo así la infiltración y la adhesión de los monocitos. La mezcla de metabolitos reduce la inhibición de la migración de monocitos de IL-8 secreción inducida por el TNF α y la ICAM-1 y VCAM-1 los niveles después de la estimulación con IL-1 β [ 51 ].

4.2. Estudios en Animales

Hay dos principales métodos estandarizados para producir un modelo animal experimental de la EII: (i) la administración oral de dextrano sulfato de sodio (DSS) en el agua potable; (ii) la administración intracolónica de ácido trinitrobenceno sulfónico (TNBS).El uso del método de DSS imita el desarrollo de la Universidad de California, mientras que los síntomas que se manifiestan después del tratamiento con TNBS presentan las características clínicas y morfológicas de CD.

En un modelo de rata inducida por DSS de la Universidad de California, la administración oral de EA usando colónica microesfera entrega (que contiene 1-10 mg / kg de EA) redujo significativamente la gravedad de las lesiones colónicas y la brevedad de la longitud del colon. Esta actividad se podría explicar por la acción antioxidante de EA, como se demuestra por la disminución de la mieloperoxidasa (MPO) y la peroxidación de lípidos en la mucosa del colon de los animales tratados con EA microesferas [ 52 ].Estos resultados se han confirmado en otro estudio, que mostró que un extracto hidroalcohólico PG (100-200 mg / kg) a partir de flores, así como los ricos en ácidos de la fracción atenuada inducida por DSS en ratones UC, la reducción de la actividad de MPO colónica y oxidativa marcadores elágico [ 53 ]. Además del efecto antioxidante, otro mecanismo propuesto para las propiedades anti-ulcerosa de EA fue la estabilización de los mastocitos. Los mastocitos juegan un papel importante en los procesos flogísticos por la liberación de muchos factores proinflamatorios, como la histamina. Administración de DSS en ratones también se asoció con un aumento en el contenido de histamina en el tejido del colon, lo que indica degranulación de los mastocitos.Extracto hidroalcohólico de PG (metanol : agua, 3 : 1) y su fracción rica en ácido elágico atenuó significativamente el aumento inducido por DSS en el nivel de histamina, lo que sugiere una capacidad para estabilizar la desgranulación de las células mástil [53 ]. Los mecanismos moleculares que subyacen a la actividad anti-inflamatoria de la EA en el intestino se aclararon en un estudio dedicado al efecto de este polifenol en la carcinogénesis de colon [ 54 ]: EA (60 mg / kg), administrada por vía oraldurante 30 semanas en una rata modelo de cáncer de colon, reduce el estado inflamatorio disminución de la expresión y la producción de la COX-2, iNOS, IL-6, y TNF- α a través de la inhibición de NF- κ B sistema [ 54 ]. El mismo mecanismo se confirmó en dos estudios de analizar el efecto anti-flogísticos de EA en la colitis inducida por TNBS en ratas: (i) en el primero se demostró que la administración de EA (10-20 mg / kg) por sonda antes y después de la inducción de la colitis aguda disminuye la gravedad y extensión de las lesiones intestinales y se inhibe la actividad de MPO, de acuerdo con estudios anteriores [ 52 , 53]. También se demostró que el tratamiento con EA fue capaz de reducir la infiltración neutrofílica y para aumentar la producción de moco en las células caliciformes. Todos estos efectos anti-inflamatorios podrían explicarse por la reducción de la expresión de la COX-2 e iNOS, a través de la inhibición de NF- κ B mediada por la activación transcripcional y la prevención de p38, JNK y ERK-1/2 MAPK fosforilación [ 55 ] ; (ii) el segundo estudio analizó efecto EA en un modelo de colitis crónica. La administración oral crónica de un extracto de fruta PG comercial (250-500 mg / kg) con o sin el enriquecimiento con EA (10 mg / kg) fue capaz de reducir los síntomas inflamatorios y lesiones histológicas, la disminución de la actividad de MPO, el TNF- α producción, y la reducción de la COX-2 y la expresión de iNOS a través de la inhibición de la MAPK y NF- κ B, pero no de PPAR- γ -vías de señalización [ 56 ].

En un modelo de rata de la UC inducida por 2,4-dinitroclorobenceno (DNCB) y ácido acético, la administración intragástrica de un extracto acuoso a partir de cáscara de PG (200-800 mg / kg) aliviado los síntomas diarreicos y ulcerosa, la disminución de la actividad de MPO, la peroxidación de lípidos, IL-1 β , y TNF- α [ 57 ].

En otro estudio, el extracto de piel de PG (PPE) demostró también para regular a la baja la expresión de genes inflamatorios (COX-2, IL-6, e IL-1 β ) en los tejidos del colon y el tejido adiposo de ratones obesos alimentados con una dieta alta en grasa [ 58]. El mismo extracto poseía también un efecto prebiótico, modulación de la microbiota intestinal hacia bifidobacterias [ 58 ], que son las bacterias muestran una alta actividad anti-flogísticos en el tracto intestinal [ 59 ]. Por otra parte, se ha demostrado in vitroque las bacterias intestinales podrían contribuir a los efectos antiinflamatorios de los extractos de PG a través de su capacidad para metabolizar los polifenoles de urolitinas activos biodisponibles y biológicos [ 50 ]. Para evaluar si las propiedades anti-flogísticos visto con el PPE eran debido al contenido de ETS o a sus urolitinas microbiota derivados, un modelo de rata de la colitis inducida por DSS se alimentó con PG extracto de piel (250 mg / kg) o urolithin A (15 mg / kg) durante 25 días antes de la administración de DSS. En ratas alimentadas con el PPE y urolitinas A, el número de bifidobacterias y lactobacilos aumentó, y el efecto se mantuvo después de la administración de DSS sólo en urolithin grupo A-alimentado. Tanto PPE y urolithin A aumentaron también el recuento de Clostridium cepas probióticas y mantuvieron después de la inducción colitis, prevención de la colonización e invasión de tejido del colon por enterobacterias patógenas [ 60 ]. El tratamiento con el PPE y urolithin Un ejerce los mismos efectos anti-inflamatorios, la regulación negativa de PGE 2 producción, así como la inducción de iNOS y los niveles de NO, sin embargo, en el caso de los EPI, estas propiedades no parecía ser suficiente para proteger la arquitectura colónica [ 60] . Otro aspecto interesante es la evaluación del destino metabólico de la PPE después del metabolismo microbiota. En el metabolismo PG hecho en ratas con colitis ha demostrado ser diferente de los que no tienen la inflamación del colon: el perfil fenólico de heces de PPE-alimentado ratas mostró la presencia de ácido elágico e incluso punicalagina contenido en PPE y trazas de urolithin A, mientras que sólo urolitinas fueron encontrados en heces de ratas sanas PPE alimentados [ 60 ]. El metabolismo baja ejercida por la microbiota intestinal en un contexto de la inflamación es una consideración importante estudiar los efectos de los compuestos fenólicos. De hecho, como se ha demostrado anteriormente, en la presencia de un estado inflamatorio pueden alcanzar, sin ninguna transformación metabólica, el lumen intestinal y ejercer directamente su actividad anti-inflamatoria. En conclusión, las propiedades anti-inflamatorias que se muestran por PG en el modelo de EII podrían explicarse por una actividad sinérgica de urolitinas, el principal compuesto activo responsable de PG efectos antiinflamatorios en sujetos sanos, con equipos de expertos y EA, sin embargo, el aumento de la bacterias prebióticas por tanto PPE y urolithin Una o ambas hipótesis tomadas en conjunto no pueden ser excluidas [ 60 ].

Aceite de semilla de la granada (PSO) se compone predominantemente de triglicéridos que contienen ácidos grasos insaturados, como ácidos linoleico conjugados, ácido oleico, ácido linolénico, ácido palmítico, y ácido esteárico. El principal ácido linolénico conjugado en PSO (que representa 60 a 80% de ácidos grasos totales) es el ácido punicic (PUA). La evidencia creciente sugiere que los ácidos grasos con dobles enlaces conjugados, tales como PUA, ejercen efectos beneficiosos en la inflamación y algunos tipos de cáncer [ 61 , 62 ]. Different in vivo estudios evaluaron los efectos del aceite de semilla de PG y Púa de la inflamación intestinal. La administración oral de PUA (800 μ g / ml) o aceite de semilla de PG (2%) antes de la inyección de TNBS en un modelo de rata de estado ulceración mejorado colitis y daño a los tejidos, lo que limita la activación de neutrófilos y la peroxidación de lípidos [ 63 ]. Los mecanismos moleculares subyacentes a estos efectos anti-inflamatorios se clarificaron por in vitro en estudios sobre los neutrófilos humanos. PUA (10 μ M) ejerció una fuerte actividad anti-oxidante, la inhibición de TNF- αinducida por ROS y la producción de NADPH oxidasa de los neutrófilos, a través de la inhibición de la p47phox fosforilación y activación de la MAPK p38 [ 63 ]. El tratamiento con pua impidió también TNF- α y bacterianas degranulación de neutrófilos inducida por fMLP, lo que resulta en una menor liberación de MPO y lesiones de partes inferiores [ 63 ]. En otro estudio se demostró que el pretratamiento con PUA (45-80 mg / die) a un IL-10 – / – ratones EII modelo mejorado los síntomas clínicos, mientras que no fue capaz de ejercer ningún efecto si se administra después del desarrollo de la EII [ 64 ] . Pua upregulated colon PPAR- δ activación y supresión de TNF- α y MCP-1 expresiones. Puesto que los efectos de PUA desaparecieron en IL-10 y PPAR- γ o – δ ratones doble knock-out, es la hipótesis de que el compuesto puro ejerce su acción a través de PPAR- γ y – δ vías [ 64 ]. Esta conclusión está de acuerdo con los resultados anteriores demuestran que PPAR representan objetivos importantes de lípidos de la dieta, mediando el mantenimiento de la homeostasis intestinal. Por otra parte, PPAR- γ expresión resulta también en beneficios terapéuticos en el modelo de colitis DSS [ 65 ], que produce los mismos efectos observados con la PUA. PSO ha demostrado ser eficaz también en un modelo de la enterocolitis necrotizante (NEC). Esta enfermedad es la principal causa de morbilidad y mortalidad en bebés prematuros y se caracteriza por una desregulación de las citoquinas inflamatorias en la mucosa intestinal y una producción alterada de mucinas (como Muc2) y los factores de trébol (TFF) por lámina propia. El tratamiento con PSO (1,5% w / w) de un modelo de ratas neonatales NEC redujo la incidencia y la gravedad de la colitis necrotizante, la protección de la barrera epitelial y la preservación de la integridad intestinal [ 66 ]. PSO disminuyó IL-6, IL-8, IL-23, IL-12, y TNF- αniveles de mRNA como la respuesta inflamatoria bien y downregulated en la mucosa intestinal en desarrollo [ 66 ].

Efectos antidiarreicos. La diarrea es uno de los principales síntomas de EII, principalmente causado por la inflamación y un aumento del tránsito intestinal que conduce a una reducción de la absorción de agua y electrolitos. Dos estudios describieron elin vivo efecto antidiarreico de PG. La inyección intraperitoneal de un extracto acuoso de las cáscaras de PG (100-400 mg / kg), así como la administración por vía oral de un extracto metanólico crudo de PG corteza (200-400 mg / kg) la disminución de la diarrea inducida por la administración de aceite de ricino en un modelo de rata [ 67 , 68 ]. Extracto acuoso PG reduce el peso de una manera dependiente de la dosis y de la motilidad intestinal, la inhibición de las contracciones del íleon también espontáneas y inducida por la acetilcolina. Hipótesis formulada para esta actividad antidiarreico incluye (i) un aumento de la reabsorción de agua y NaCl, la reducción de la motilidad intestinal y (ii) una disminución de calcio citosólico, ya sea mediante la inhibición de Ca2 + afluencia o Ca 2 + liberación de los almacenes intracelulares, lo que resulta en relajación del músculo liso de rata ileal [ 68 ].Por otra parte, el extracto metanólico PG ejerce una actividad antioxidante potente (IC 50 11,7 μ g / ml) y el óxido nítrico significativamente depurado (IC 50 12,5 μ g / ml), una molécula implicada en el efecto diarrea inducida por aceite de ricino.Retraso del tránsito intestinal demostrado por el extracto crudo PG podría explicarse con un aumento de la absorción de agua y electrolitos, dando como resultado una disminución del número de heces húmedas [ 67 ].